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Le jeu Star Trek Online commence 30 ans après les événements de Star Trek: Nemesis et 22 ans après la destruction de Romulus (vu dans Star Trek (2009). L'année est 2409 et l'infiltration par l'Ondine (Espèce 8472) a conduit à un nouveau guerre entre la Fédération et l'Empire Klingon, et une République Romulien (sous le protégé de Spock D'Tan) s'est séparée des restes de l'Empire Star Romulien (sous l'Impératrice Sela). Le jeu couvre les personnages, les lieux et les événements de toutes les séries et films, y compris les dernières sorties telles que Star Trek : Picard.

Le façon de jouer consiste à jouer un personnage de la faction souhaitée dans un monde ouvert, avec divers emplacements et éléments de l'univers Star Trek. Il présente une combinaison d'espace, où vous prenez le contrôle d'un vaisseau spatial, et d'une partie au sol du jeu, où vous contrôlez un avatar à la première ou à la troisième personne. Le jeu commence par une personnalisation du personnage et un didacticiel présentant au joueur les mécanismes de base et les formats de jeu disponibles, tels que le PvE (scénario épisodique, files d'attente PvE), le PvP et d'autres contenus lentement déverrouillés avec le nivellement.